Mise au point d'un test de détection de la mutation L858R du gène du Récepteur de l'EGF par PCR quantitative en temps réel

Extraits

[...] Mots-clés EGFR, mutation, cancer du poumon, détection, PCR quantitative, séquençage direct. Abstract Lung cancer is one of the deadliest cancers in industrialized country. Several innovative targeted treatments specifically inhibit epidermal growth factor receptor (EGFR) widely express in cancer. Only a limited part of treated patient displays therapeutic benefit during clinical trials. Most of those patients had tumor harbouring mutation in EGFR tyrosine kinase domain. The detection of such EGFR mutations appears as a predictive biomarker of treatment response. The deletion in exon 19 and the L858R represent major part of observed mutations. [...]

[...] Courbe d'amplification des différentes dilutions d'ADN muté L'amplification est médiocre. Les courbes de fluorescence faibles sont présentées en Annexe 12. Le test n'est pas utilisable en faible quantité d'ADN muté. Apparemment, le problème se situe dans le clivage de la sonde. Il faut jouer sur les différentes conditions de PCR (réactifs, Tm, nombre de cycles etc Les réactifs de PCR Taqman (DnTP, MgCl2, Taq polymérase etc ) sont fournis par un unique produit appelé UMM MASTER MIX, acheté tel quel aux fournisseurs de réactifs (Applied Biosystems). [...]

[...] Courbe de fluorescence seuil de détection 25 Figure 22. Courbe d'amplification des différentes dilutions d'ADN muté 25 Figure 23. Electrophorèse sur gel d'agarose des produits PCR 26 Figure 24. Courbe d'amplification des différentes dilutions (56°C) 27 Figure 25. Courbe de fluorescence 20ng/PCR, 56°C 27 Figure 26. Courbe d'amplification des différentes conditions 28 Figure 27. Courbe d'amplification en fonction de la concentration MgCl Figure 28. Courbe d'amplification à 50 cycles 30 Figure 29. Courbe d'amplification des différentes dilutions (50 cycles) 31 Bibliographie Applied Biosystems, Taqman® Gene Expression Assays, Mai 2005 Bru Martin-Laurent « Pcr quantitative », www.dijon.inra.fr, Décembre 2004 De la Motte Rouge Valent Ambrosetti Vielh Lacroix « Facteurs prédictifs de réponse aux inhibiteurs tyrosine kinase du récepteur à l'EGF dans le cancer bronchique ». [...]

[...] Conclusion Au cours de ce stage, j'ai beaucoup appris. Les apports que j'ai tiré de cette expérience professionnelle peuvent être regroupés autour de trois idées principales : les compétences acquises, les difficultés rencontrés et solutions apportées ainsi que la vie en société. J'ai acquise de nombreuses et diverses connaissances, notamment en matière de génomique et de culture cellulaire, ce sur quoi j'ai travaillé. Ce qui ne m'a pas empêché de m'instruire sur d'autres sujets, grâce aux nombreux projets en cours au laboratoire. [...]

[...] Présentation de l'entreprise 6 I.1 Historique 6 I.2 Description générale de L'IGR 6 I.3 La direction de la recherche Clinique et Translationnelle (DRCT) 7 II. Travail de recherche 9 II.1.Introduction 9 II Théorie Erreur Signet non défini. II Objectif 11 II.2. Matériels et Méthodes 12 II Le matériel 12 II Méthodes 13 II Extraction de l'ADN 13 II La PCR 13 II La PCR quantitative en temps réel 14 II Réactifs et protocoles 15 II Choix des amorces 17 II.3. [...]