Comparaison de la culture d'ostéoclastes murins issus d'une lignée avec les ostéoclastes dérivés de cellules primaires

Yasmine K.

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Comparaison de la culture d'ostéoclastes murins issus d'une lignée avec les ostéoclastes dérivés de cellules primaires

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Thèmes abordés

Culture d'ostéoclastes, ostéoclaste murin, ostéoclaste dérivé, cellule primaire, tissu osseux, autorégération, autogreffe, biomatériaux, thérapie cellulaire, ingiénerie tissulaire, Ingénierie de la santé et biomatériaux, Université Paris Descartes, remodelage osseux, Bioingénierie et Bioimagerie Ostéo-Articulaires, laboratoire médical

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Résumé du document

Le tissu osseux est en remaniement permanent grâce au processus naturel du remodelage osseux ; il est également doté d'une capacité d'autorégénération en cas de lésion. Cependant, cette autorégénération devient insuffisante dans certains cas, en particulier en cas de défauts osseux de taille critique. Jusqu'à présent, les autogreffes restent la meilleure solution pour la réparation osseuse en termes de biocompatibilité, d'ostéocondution et d'ostéoinduction, mais elles présentent certaines limites rendant leur utilisation parfois impossible, d'où la nécessité de développer des produits alternatifs de régénération osseuse pouvant répondre à cette problématique.
Les progrès scientifiques récents dans le domaine des biomatériaux et des thérapies cellulaires ont permis des avancées exceptionnelles dans le développement de produits d'ingénierie tissulaire combinant des biomatériaux, cellules et facteurs biologiques en s'inspirant de la structure naturelle du tissu osseux.

Sommaire

Partie bibliographique
1. Le tissu osseux
2. Problématique de la régénération osseuse
3. Ingénierie tissulaire osseuse
4. Intérêt de la substitution ionique de l'hydroxyapatite
5. Biomatériaux et ostéoclastes
Matériel et méthodes
1. Biomatériaux
2. Culture cellulaire
3. Coloration TRAP (Tartrate-Resistant Acid Phosphatase)
4. Coloration au bleu de toluidine
5. Quantification des résultats
6. Analyse statistique
Résultats et discussion
1. Détermination des conditions optimales pour la différenciation des RAW 264
2. Détermination des conditions optimales pour la différenciation des monocytes murins
3. Comparaison des RAW264.7 avec les monocytes murins

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Extraits

[...] En termes de différenciation et de résorption, nous avons obtenu de meilleurs résultats en utilisant les cellules de la moelle osseuse décongelées et amplifié sur plastique ; ainsi les ostéoclastes obtenus, en plus d'être fonctionnels, sont de plus grande taille et possèdent plusieurs noyaux. On peut dire que l'utilisation des monocytes primaires murins issus de la moelle osseuse est meilleure que l'utilisation de la lignée cellulaire RAW264.7. Les bons résultats obtenus avec les cellules de moelle osseuse décongelées sont intéressants d'un point de vue pratique, car il est alors possible de préparer un stock de cellules congelées et de les décongeler au moment de l'étude sur le support. [...]

[...] Ils ont été cultivés dans du milieu α-MEM supplémenté de 10% de SVF et ATB, des facteurs essentiels à la différenciation et l'activation des ostéoclastes sont ajoutés : La PGE2 à 35 ng/ml, le M-CSF à 20 ng/ml et le RANKL à 50ng/ml. Le milieu est acidifié à pH=7 deux jours avant la fixation qui a eu lieu après 14 jours de culture. Après une coloration TRAP, nous avons observé beaucoup de pré-ostéoclastes ayant un seul noyau et de forme allongée avec des pseudopodes; en revanche, le nombre d'ostéoclastes ayant plus de deux noyaux était très limité pour les 2 densités utilisées. Par ailleurs, nous constatons une différence significative dans le nombre des pré-ostéoclastes entre les 2 densités d'ensemencement. [...]

[...] Les résultats avec un p [...]

[...] Mais jusqu'à présent, les résultats cliniques de ces dernières restent les meilleurs. Plus d'efforts et de recherches devront être réalisés afin d'optimiser ces produits d'ingénierie tissulaire. Ingénierie tissulaire osseuse Les produits d'ingénierie tissulaire sont principalement constitués de trois composantes : Un biomatériau qui fournit la structure et le substrat pour la croissance et le développement du tissu osseux Une source de cellules pour induire la formation osseuse : les cellules ostéoprogénitrices, les plus couramment utilisées étant les cellules souches mésenchymateuses (CSM) qui sont des cellules multipotentes capables de se différencier en plusieurs types cellulaires, en particulier en ostéoblastes. [...]

[...] Bone Research Protocols [Internet]. Totowa, NJ: Humana Press; 2012 [cité 9 sept 2020]. p. 103-17. (Methods in Molecular Biology). Disponible sur: https://doi.org/10.1007/978- 1-61779-415-5_8 Ng AY, Tu Shen Xu Oursler MJ, Qu et al. Comparative Characterization of Osteoclasts Derived From Murine Bone Marrow Macrophages and RAW 264.7 Cells Using Quantitative Proteomics: PROTEOMIC COMPARISON OF OSTEOCLAST MODELS. JBMR Plus. nov 2018;2(6):328-40. [...]

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