Analyse des marqueurs lipidiques placentaires dans le cadre d'un PHRC sur le diabète et la macrosomie foetale

Extraits

[...] Analyse des marqueurs lipidiques placentaires dans le cadre d'un PHRC sur le diabète et la macrosomie fœtale Introduction. • Dans le cadre du master Sciences de la matière. • Stage de deux mois en laboratoire . • Découverte de la Biochimie. • Découverte de l'activité de recherche Sommaire : • • • • • • • Introduction. Le PHRC. Le Placenta. Les principales techniques . La PCR en temps réel. Résultats de PCR. Conclusion Le PHRC. Projet interrégional • 70 Femmes atteintes de diabète de type 1 • 70 femmes atteintes de diabète de type 2 • 70 femmes témoins 4 Le tissu d'intérêt, le placenta. [...]

[...] • Utilisation d'un marqueur fluorescent: le SyBr Green I. • Quantification relative de la quantité d'ADN cible par les gènes de ménage Description du SYBR GREEN. • Molécule qui se fixe entre les acides nucléiques doubles brins. • Fluorescent lorsqu'il est lié à l‘ADN Courbe de fusion. F • Détection de la courbe de décroissance de fluorescence par dissociation des amplicons en fonction de la température. • Dépend de l'état d'hybridation du produit PCR. • Varie le plus lorsque la température appliquée est égale au Tm (Température de fusion.) • Permet de détecter la présence d'un ou plusieurs produits amplifiés. [...]

[...] Pas de dimères de primers 14 Quantification relative d'un gène au niveau d'un tissu. • En q-PCR, relative nécessité de normaliser par rapport à des repères (gène de ménage et calibrateur). ⮚ Gène de ménage: qui ne varie pas dans les tissus étudiés. ⮚ Echantillon calibrateur: sert d'échantillon de référence pour les mesures. • Importance des duplicates. Première normalisation : ΔCt = Ct (gène cible) - Ct (gène de ménage) Seconde normalisation : ΔΔCt = ΔCt Echantillon – ΔCt Calibrateur • Calcul de l'efficacité : E (-ΔΔCt) 15 Droite standard. [...]